Qiagen 一步法RT-PCR試劑盒

Qiagen 一步法RT-PCR試劑盒包含Omniscript逆轉錄酶和Sensiscript逆轉錄酶的混合物、HotStarTaq DNA Polymerase、QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer、dNTP混合液和Q-Solution。Q-Solution是一種新型的輔助劑，有助于實現“困難”模板（如：高GC含量的模板）的高效擴增。簡單的單管反應體系構建和優(yōu)化的試劑盒組分確保了結果成功且靈敏度高。

性能

QIAGEN OneStep RT-PCR Kit提供方便的規(guī)格，可使用RNA模板進行高靈敏度和特異性的RT-PCR。試劑盒中包含優(yōu)化的組分，可在同一反應混合液中進行逆轉錄和PCR擴增，完成"一步式"反應。*的酶組合和專門研發(fā)的反應緩沖液確保在一個管中進行高效、高特異性的逆轉錄和PCR，無需優(yōu)化。試劑盒提供的新型的、雙陽離子PCR緩沖液確保在寬退火溫度范圍內得到高產量的特異性PCR產物。使用Q-Solution可提高不理想的RT-PCR的表現，這種*的輔助劑可幫助逆轉錄并高效擴增具有高GC含量和復雜二級結構的模板。

原理

QIAGEN OneStep RT-PCR Kit可對多種RNA模板進行簡單、靈敏的一步式RT-PCR。

QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix含有為逆轉錄和PCR反應特別設計的酶。*組合的Omniscript和Sensiscrip逆轉錄酶對RNA模板有高度親和性，確保RNA逆轉錄的靈敏度達到1 pg到2 µg。逆轉錄完成后，升溫至95°C，15分鐘，活化HotStarTaq DNA Polymerase同時使逆轉錄酶失活。這種方法可減少引物二聚體等非特異性擴增產物的生成，并減少背景的影響，確保RT-PCR的高靈敏度和可重復性。

退火溫度范圍寬

引物的退火溫度取決于堿基對的組成（如A、T、G、C核苷酸的比例）、引物的濃度和反應的離子環(huán)境。QIAGEN PCR Buffers含有K⁺和NH₄⁺，使用該緩沖液可在很寬的溫度范圍內增加特異性PCR產物的產量。其原理是破壞非特異性結合的引物對，提供更加可靠的反應環(huán)境，減少繁瑣的溫度優(yōu)化過程。相反，如使用僅含K⁺的PCR或一步式RT-PCR緩沖液，PCR退火溫度的范圍較窄，可靠性較差。

QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer專為提高逆轉錄和PCR擴增的效率而設計。該緩沖液含有新型輔助劑，可防止逆轉錄酶對PCR擴增的抑制，而這是一步式RT-PCR中常見的問題。該緩沖液確保在較大的溫度范圍和Mg²⁺濃度范圍內，引物與模板特異性結合，可對多種RNA模板進行高效的RT-PCR擴增。QIAGEN OneStep RT-PCR Kit含有Q-Solution，這是可修飾核酸熔解行為的新型輔助劑。Q-Solution可促進高GC含量或含較多二級結構的模板的逆轉錄和擴增。 使用Q-Solution可簡化復雜模板RT-PCR的優(yōu)化過程。QIAGEN OneStep RT-PCR Kit含有您所需的所有試劑，可進行快速、簡便的RT-PCR，用于多種靈敏的應用（見表）。

操作流程

使用QIAGEN OneStep RT-PCR Kit可快速、簡單的進行RT-PCR反應體系構建。無論是何種應用，即無論是病毒檢測、分子診斷研究還是基因表達，您只需將所有試劑在一個離心管中混合即可開始PCR擴增。反應混合液含有逆轉錄和PCR反應所需的所有試劑，無需添加其他試劑即可開始反應（參見下表）。

應用

QIAGEN OneStep RT-PCR Kit適用于RT-PCR分析，包括：

• 病毒檢測
• 單細胞RT-PCR
• 基因表達分析

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