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【企業(yè)文化】

通常用靶標(biāo)-核酸復(fù)合物的平衡解離常數(shù)Kd表征。Kd值越小，表明親和力越強(qiáng)。當(dāng)使用梯度濃度的核酸與靶標(biāo)共同孵育后，檢測(cè)核酸適配體-靶標(biāo)復(fù)合物的濃度，按公式Y(jié)=Bmax X/(Kd + X)即可求算出Kd值。其中確定Y值的方法包括熒光成像法、熒光光譜法、流式細(xì)胞儀法、表面等離子共振法、DNA捕獲元件法和ELISA法。細(xì)菌靶標(biāo)與核酸適配體結(jié)合的親和力和特異性是評(píng)價(jià)所篩選的適配體的重要參數(shù)。通常用靶標(biāo)-核酸復(fù)合物的平衡解離常數(shù)Kd表征相互作用。Kd值越小，表明兩者相互作用越強(qiáng)。當(dāng)使用梯度濃度的核酸與靶標(biāo)共同孵育后，檢測(cè)核酸適配體-靶標(biāo)復(fù)合物的濃度，按下述公式即可求算出Kd值。Y=Bmax X/(Kd + X)上述公式中：Y：核酸適配體-靶標(biāo)復(fù)合物濃度；X：核酸濃度；Bmax：常數(shù)。Kd測(cè)定時(shí)可使用熒光標(biāo)記的核酸。通過測(cè)定復(fù)合物的熒光強(qiáng)度求算Y值，Y值的確定有多種方法：1、熒光成像法將熒光標(biāo)記的核酸與靶標(biāo)的孵育混合物經(jīng)離心去除未結(jié)合的適配體后，置于熒光顯微鏡下觀測(cè)，直接對(duì)帶有熒光的成像菌體計(jì)數(shù)，可求出Y值。2、熒光光譜法將核酸與靶標(biāo)的孵育混合物通過離心等方法分離后，使用熒光光譜儀測(cè)定核酸-靶標(biāo)復(fù)合物的熒光強(qiáng)度，可作為Y值。3、流式細(xì)胞儀法將孵育混合物通過流式細(xì)胞儀，測(cè)定帶有熒光標(biāo)記的核酸-靶標(biāo)復(fù)合物的數(shù)量。流式細(xì)胞儀可以對(duì)復(fù)合物進(jìn)行定量，同時(shí)將核酸-靶標(biāo)復(fù)合物與游離的核酸或靶標(biāo)分離。

これは、通常、標(biāo)的 - 核酸複合體の平衡解離定數(shù)Kdを特徴とする。 Kd値が小さいほど、親和性は強(qiáng)い。標(biāo)的核酸の濃度勾配は、核酸アプタマーを検出中でインキュベートされたとき - 式Y(jié) = BmaxのX /（Kdを+ X）によれば、標(biāo)的複合體の濃度をKd値を見つけるために計(jì)算されました。 Y値の測(cè)定方法としては、蛍光イメージング法、蛍光分光法、フローサイトメトリー法、表面プラズモン共鳴法、DNA捕捉要素法、ELISA法等が挙げられる。細(xì)菌標(biāo)的の核酸アプタマーへの結(jié)合の親和性および特異性は、スクリーニングされたアプタマーを評(píng)価するための重要なパラメーターである。相互作用は、典型的には、標(biāo)的 - 核酸複合體の平衡解離定數(shù)Kdによって特徴付けられる。 Kd値が小さいほど、2つの間の相互作用が強(qiáng)くなる。核酸の勾配濃度を標(biāo)的とインキュベートすると、核酸アプタマー - 標(biāo)的複合體の濃度が検出され、以下の式によりKd値を算出することができる。 Y = Bmax×/（Kd + X）上記式中、Yは核酸アプタマー - 標(biāo)的複合體濃度、Xは核酸濃度、Bmaxは定數(shù)である。蛍光標(biāo)識(shí)された核酸は、Kdアッセイで使用することができる。 Y値計(jì)算複雑な要件の蛍光強(qiáng)度を測(cè)定することにより、Yの値が決定されるいくつかの方法がある：1、蛍光イメージング法、蛍光標(biāo)識(shí)された標(biāo)的核酸との混合物は、未結(jié)合アプタマー配置された蛍光を除去するために遠(yuǎn)心分離しインキュベートY値は、顕微鏡下で蛍光を用いて撮像した細(xì)胞を直接観察することによって得ることができる。蛍光強(qiáng)度標(biāo)的複合體Yの値として使用することができる - 図2に示すように、混合物をインキュベートし、標(biāo)的核酸と蛍光分光法は、遠(yuǎn)心分離または蛍光分光計(jì)を用いて、核酸アッセイは、等により分離しました。フローサイトメトリーインキュベーション混合物をフローサイトメーターに通し、蛍光標(biāo)識(shí)した核酸 - 標(biāo)的複合體の量を決定した。フローサイトメーターは、核酸 - 標(biāo)的複合體を遊離核酸または標(biāo)的から分離しながら複合體を定量することができる。

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