小菌落腦膜炎奈瑟菌診斷血清

廣州健侖生物科技有限公司

【儲藏條件】

2~8℃避光保存，在標明的有效期內(nèi)使用。

【有效期】

24個月

【產(chǎn)品名稱】

通用名：腦膜炎奈瑟菌診斷血清英文名：antisera for N.meningitidis

【產(chǎn)品說明】

本套血清用于A、B、C、W、X、Y等6個常見血清QUN（serogroup）腦膜炎奈瑟菌的血清群鑒定，將相應(yīng)血清群腦膜炎奈瑟菌制備滅活抗原，免疫家兔所得，血清產(chǎn)品經(jīng)免疫吸附去除了非特異性凝集成分，具有效價高，特異性強的特點。

小菌落腦膜炎奈瑟菌診斷血清

【規(guī)格】

每種血清群1瓶，每瓶2ml，均為使用液。

【使用方法】

1.產(chǎn)品在使用前，由冰箱拿出，恢復(fù)溫度到室溫后使用。

2.樣品分離培養(yǎng)物，經(jīng)鏡檢和生化鑒定，確定為腦膜炎奈瑟菌后，再進行血清分群檢測，如果未能確定為腦膜炎奈瑟菌，不宜直接進行血清凝集檢測，以免產(chǎn)生假陽性結(jié)果。

3.待鑒定細菌在血平板或巧克力平板上，5% CO₂，培養(yǎng)48小時。

4.用酒精擦拭玻璃片。

5.用蠟筆或防水筆將玻璃片分為8個方格。

6. 在玻片每個方格的下半部分，用移液器加5%的福爾馬林溶液（基于生物安全目的）。

7. 用無菌或一次性10μl接種環(huán)挑取BAP平板上過夜培養(yǎng)的細菌菌落。

8. 在玻片上將細菌與5%的福爾馬林溶液混勻，混勻后的液體應(yīng)該不透明，在加抗血清前應(yīng)保持細菌懸液不干燥。

9. 在玻片的上方加10μl血清群特異的抗血清，同時在陰性對照側(cè)加BS或者生理鹽水。

10. 緩慢的混合細菌懸液和抗血清，使上部的抗血清和下部的細菌懸液充分混合1-2分鐘。不要做旋轉(zhuǎn)晃動，以免不同血清群的血清會相互混合污染。

11.在燈光下，黑暗背景條件下觀察結(jié)果。1-2分鐘內(nèi)呈2+及以上凝集現(xiàn)象為陽性，1-2分鐘內(nèi)呈現(xiàn)2+以下凝集現(xiàn)象為陰性。如果過了2分鐘，才發(fā)生的凝集反應(yīng)按陰性處理。

【凝集反應(yīng)的強度等級】

當抗血清與細菌接觸，會引起凝集反應(yīng)，使細胞（細菌）凝集或呈簇，細胞（細菌）上清液變得清亮，細胞懸液濃度或使用的抗血清濃度不同，會產(chǎn)生不同的強度的凝集反應(yīng)，見圖示

4+ 所有的細胞都發(fā)生凝集，細胞懸液清亮。

3+ 75%的細胞發(fā)生凝集，細胞上清略微渾濁不清。

2+ 50%的細胞發(fā)生凝集，細胞上清略微渾濁不清。

1+ 25%的細胞發(fā)生凝集，細胞上清略微渾濁不清。

+/- 少于25%的細胞發(fā)生凝集，可見有顆粒狀的成分。

0 沒有肉眼可見的凝集，上清懸液渾濁、平滑。

【血清群確定】

1. 1-2分鐘內(nèi)，出現(xiàn)3+或4+凝集為陽性反應(yīng)（強陽性反應(yīng)）。對于B群腦膜炎奈瑟菌來說，如果出現(xiàn)2+及以上的凝集則可認為陽性。

2. 陰性反應(yīng)是+/-、1+ 或 2+（弱凝集）的凝集程度。

3. 當菌株僅與一種抗血清出現(xiàn)凝集，但和生理鹽水不凝集時才能鑒定為該種血清型。

4. 如果不能確定血清群，菌株記為不能分群腦膜炎奈瑟菌（NG）。

5. 關(guān)于不能分群腦膜炎奈瑟菌（NG）菌株。

6. 在生理鹽水中凝集，無論與任何抗血清發(fā)生強反應(yīng)，都應(yīng)標記為自凝菌。

7. 在生理鹽水中不自凝，和多種血清出現(xiàn)凝集，記為NG。

8. 不和生理鹽水凝集，也不和任何一個血清凝集也記作NG。

【結(jié)果難以判斷時解決方案】

腦膜炎奈瑟菌具有可變性（有莢膜與無莢膜，小菌落與大菌落，慢生長與快生長，強凝集與弱凝集），有時候很難清除解釋結(jié)果，一些建議如下：

1. 挑取同一平板上的另一個細菌克隆進行重復(fù)凝集試驗。

2. 如果玻片上的結(jié)果不明確，將試管中配置懸液，重復(fù)該試驗。

3. 加20µl抗血清直接涂于玻片上，直接加一環(huán)細菌進行混均凝集。

4. 再次培養(yǎng)，第二天進行重新試驗。

5. 如果當天的平板上有各種大小不一的菌落，每種菌落再次分離純培養(yǎng)，第二天每種菌落進行試驗。大菌落一般會有比較好的凝集反應(yīng)，小菌落次之。

6. 如果試驗中的問題還是不能解決，應(yīng)當和對照菌株同時進行試驗，確保試劑的正確性。

【血清質(zhì)量控制】

在對未知的菌落進行血清分群之前，應(yīng)選用一套腦膜炎奈瑟菌參考菌株（A, B, C, W, X, Y）和一株可分群的腦膜炎奈瑟菌進行質(zhì)量控制檢測。操作步驟：

1. 新購進的每一批次抗血清要用參考菌株進行檢測。

2. 半年后重復(fù)質(zhì)量控制檢測

3. 如果血清管暴露于超過4℃環(huán)境，或者懷疑血清被污染時，也要對血清進行重新的質(zhì)量控制。

4. 關(guān)于血清分群和質(zhì)量控制，每一批次的抗血清需要使用所有的參考菌株進行實驗室驗證，記錄質(zhì)量控制驗證結(jié)果。

【血清質(zhì)量控制檢測結(jié)果判讀】

1. 通過質(zhì)量控制檢測

與同源性的抗原反應(yīng)，1-2分鐘內(nèi)，出現(xiàn)3+或 4+程度的凝集；單一血清群的抗血清不與其他血清群的腦膜炎奈瑟菌反應(yīng)，不與NG菌株凝集反應(yīng)，鹽水不自凝。

2. 分群血清質(zhì)量控制檢測失敗

如果抗血清與一種或多種參考菌株凝集反應(yīng)，或/和NG參考菌株反應(yīng)，鹽水自凝，則血清不能使用。

【其他所需材料】

潔凈玻片、生理鹽水（0.85%的氯化鈉溶液）、5%的福爾馬林溶液、接種環(huán)或移液器。

【注意事項】

1. 本產(chǎn)品只能作為腦膜炎奈瑟菌血清型判定的輔助方法，zui終的判定需形態(tài)學(xué)、生化方法和血清學(xué)方法共同進行。

 2. 本產(chǎn)品應(yīng)避免冷凍。反復(fù)凍融會使血清產(chǎn)生沉淀。

3. 本產(chǎn)品在保存過程中可能會產(chǎn)生渾濁或沉淀，這并不表示該產(chǎn)品已被污染。離心或者過膜去掉渾濁或沉淀后，可以正常使用。

4. 本產(chǎn)品含有0.1%*作為防腐劑，丟棄時需倒入下水管，并用大量的水沖洗下水管。

廣州健侖生物公司提供SSI血清產(chǎn)品，包括沙門氏菌，志賀氏菌，大腸桿菌，肺炎鏈球菌，嗜血桿菌等。并且提供德國有名血清品牌SiFin的核心血清產(chǎn)品，德國SiFin血清質(zhì)量好，實驗*，已被各高校實驗室，研究所列為推薦血清產(chǎn)品！詳情可咨詢工作人員！

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布氏桿菌是革蘭氏陰性需氧桿菌。分類上為布氏桿菌屬。本屬細

菌為非抗酸性，無芽胞，無莢膜，無鞭毛，呈球桿狀。組織涂片

或滲出液中常集結(jié)成團，且可見于細胞內(nèi)，培養(yǎng)物中多單個排列

。布氏桿菌屬有6個種，即牛種、羊種、豬種、綿羊種、犬種和細

菌鼠種，前5種感染家畜。布氏桿菌在土壤、水中和皮毛上能存活

幾個月，一般消細菌能很快將其殺死。
診斷要點
由于發(fā)生流產(chǎn)的病因很多，而該病的流行特點，臨床癥狀和病理

變化均無明顯的特征，同時隱性感染較多，因此，確診要依靠實

驗診斷?
流行特點
母羊較公羊易感性高，性成熟后對本病極為易感。消化道是主要

感染途徑，也可經(jīng)配種感染，羊群一旦感染此病，主要表現(xiàn)是孕

羊流產(chǎn)，開始僅為少數(shù)，以后逐漸增多，嚴重時可達半數(shù)以上，

多數(shù)病羊流產(chǎn)1次。
臨床癥狀
多數(shù)病例為隱性感染。懷孕羊發(fā)生流產(chǎn)是本病的主要癥狀，但不

是必有的癥狀。流產(chǎn)多發(fā)生在懷孕后的3-4個月，有時患病羊發(fā)生

關(guān)節(jié)炎和滑液囊炎而致跛行，公羊發(fā)生睪丸炎，少部分病羊發(fā)生

角膜炎和支氣管炎。
病理變化
剖檢常見的病變是胎衣部分或全部呈黃細菌膠樣浸潤，其中有部

分覆有纖維蛋白和膿液，胎衣增厚并有出血點。流產(chǎn)胎兒主要為

敗血癥病變，漿膜與黏膜有出血點與出血斑，皮下和肌肉間發(fā)生

漿液性浸潤，脾臟和淋巴結(jié)腫大，肝臟中出現(xiàn)壞死灶。公羊得病

時，可發(fā)生化膿性壞死性睪丸炎和附睪炎，睪丸腫大，后期睪丸

萎縮。
實驗診斷
主要根據(jù)病原學(xué)檢查、血清學(xué)檢查和細菌反應(yīng)檢查情況做出診斷。
Brucella is Gram-negative aerobic bacilli. The genus is Brucella. This is fine

Non-acid bacteria, non-spore, non-capsule, no flagella, were club-shaped. Tissue smear

Or exudate often gather into a group, and can be seen in the cells, the culture more than a single arrangement

. There are 6 species of brucellosis, namely cattle, sheep, pig breeds, sheep breeds, breeds and fine breeds

Fungus species, the first five kinds of infected livestock. Brucella can survive in soil, water and fur

A few months, the general elimination of bacteria can kill it quickly.
Diagnostic points
Due to the many causes of miscarriage, and the prevalence of the disease, clinical symptoms and pathology

No obvious changes in the characteristics of the same time, more hidden infections, therefore, confirmed to rely on real

Diagnostic test?
Popular features
Ewes more susceptible than the ram, sexual maturity is extremely susceptible to the disease. The digestive tract is the main

Infection, but also by breeding, flock once infected with the disease, the main performance is pregnant

Sheep abortion, only a few start, gradually increased after more than half of serious cases,

Abortion of most sick sheep 1.
Clinical symptoms
Most cases of latent infection. Abortion in pregnant sheep is a major symptom of the disease, but not

Is a must have symptoms. Abortion occurred in 3-4 months after pregnancy, and sometimes sick sheep

Arthritis and synovitis caused by limp, ram orchitis, a small part of the sick sheep

Keratitis and bronchitis.
Pathological changes
Common necropsy lesions are part or all of the yellow carcase gel-like infiltration, which have ministry

Fibrin and pus covered with fiber, thickening of the child and bleeding points. Abortion fetus is mainly

Sepsis lesions, serosa and mucosa bleeding and bleeding spots, subcutaneous and intramuscular occurred

Serous infiltration, spleen and lymph nodes, necrotic lesions in the liver. The ram gets sick

When purulent necrotic orchitis and epididymitis can occur, testicular swelling, late testicular

Shrinkage.
Experimental diagnosis
Mainly based on etiological examination, serological examination and bacterial reaction to check the situation to make a diagnosis

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