　　登革熱試劑盒是用來(lái)定性檢測(cè)人血清、血漿和全血中的登革熱病毒IgM和IgG抗體的方法。這方法能用來(lái)鑒別初次和二次感染。它僅能用來(lái)檢測(cè)具有臨床登革熱癥狀的病人的樣本。結(jié)果是假定陽(yáng)性的，必須經(jīng)病毒分離、雙份血清分析、免疫組織化學(xué)檢測(cè)抗原或病毒核酸檢測(cè)證實(shí)有登革熱病毒感染。

　　登革熱病毒PCR檢測(cè)試劑盒反應(yīng)五要素:參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP.模板和Mg2+

　　引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:

　?、僖镩L(zhǎng)度:15-30bp.常用為20bp左右。

　?、谝飻U(kuò)增跨度:以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。

　?、垡飰A基:G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

　?、鼙苊夤瓅物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引|物間互補(bǔ)，特別是3端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的打增條帶。

　?、菀?端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。

　　⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)，被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn)，這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。

　?、咭锏奶禺愋?引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。

　　引物量:每條引物的濃度0.1~1umo或10~100pmol,以弓|物量“生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)弓|起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加弓|物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

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